高速冷凍研磨均質儀對動物組織之雞內臟研磨實案例分享

　　使用高速冷凍研磨均質儀研磨雞內臟，后續(xù)建庫做HI-C實驗。由于HI-C 實驗對樣本完整性和染色質構象的要求嚴苛，尤其是雞內臟(如肝臟、腎臟)這類富含酶類和結締組織的樣本，全程低溫保護與徹底均質化是下游建庫成功的關鍵。我們通過凈信高速冷凍研磨儀(JXFSTPRP-192CL)處理雞肝臟樣本，成功解決了 “低溫維持難”“組織堅硬磨不碎” 兩大痛點，為 HI-C 實驗提供了高質量的起始材料。

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　　高速冷凍研磨均質儀 JXFSTPRP-192CL

　　實驗背景：雞內臟樣本的兩大挑戰(zhàn)

　　HI-C 實驗需要保留染色質的空間構象，任何溫度波動或機械損傷都可能導致 DNA 斷裂、交聯失效，最終影響互作信號的準確性。而雞肝臟組織存在兩個顯著難點：

　　低溫敏感：樣本中含大量內源性核酸酶和蛋白酶，常溫下 10 分鐘即可引發(fā)染色質降解，必須全程維持 - 20℃以下環(huán)境;

　　質地堅硬：雞肝臟雖為軟組織，但富含結締組織和血管，傳統研磨易出現 “塊狀殘留”，導致細胞破碎不完全，交聯效率差異大。

　　前期兩次手工研磨嘗試均失敗：第一次因液氮揮發(fā)后溫度回升，樣本解凍后染色質降解，建庫后測序數據中 “無效互作” 占比超 40%;第二次雖全程補加液氮，但手工研磨不徹底，鏡檢發(fā)現 30% 的組織塊未破碎，最終文庫復雜度不足，實驗被迫中止。

　　解決方案：高速冷凍研磨均質儀的 “低溫 + 高頻” 協同策略

　　針對雞內臟樣本特性，我們采用凈信高速冷凍研磨均質儀，通過以下參數設置實現突破：

　　全程超低溫鎖鮮，阻斷酶活性，高頻振動破碎，實現均質化

　　第一組測試參數提前將樣品放入液氮里面冷凍10分鐘，再放入2 mL離心管里，放了一顆3mm的珠子，一顆2mm的珠子，后用65HZ,研磨兩分鐘。沒有研磨粉碎，樣品太堅硬了。

　　第二組測試參數 用了5ml的研磨管，放了5mm的研磨珠兩顆，3mm研磨珠一顆，樣品還是從度-80度冰箱拿出后放入液氮里面浸泡10分鐘后，調65HZ,研磨一分鐘后，出來效果很好，是粉末狀。

　　操作總結：第二次的研磨設置達到了研磨要求，當樣品粉碎不徹底的情況下，可以更換一下大號珠子重新進行研磨。

　　實驗效果：

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　　樣品研磨前后效果對比圖

　　關鍵操作要點與注意事項

　　1、研磨管對稱裝載：因儀器高頻振動，需在相對位置放置重量一致的平衡管(含等量緩沖液 + 研磨珠)，避免儀器偏移導致的溫度波動;

　　2、研磨珠選擇：雞內臟組織建議用 “3mm 鋼珠 + 1 顆 5mm 鋼珠” 組合，兼顧破碎效率與樣本接觸面積;

　　3、防污染處理：每批次實驗后，研磨倉用 75% 酒精擦拭，研磨管和鋼珠經 121℃高壓滅菌 30 分鐘，避免交叉污染(尤其處理不同雞個體樣本時)。

　　實驗結論：高速冷凍研磨均質儀通過 “超低溫環(huán)境 + 高頻振動”的協同作用，完美解決了雞內臟樣本在 HI-C 實驗中的兩大痛點：既通過全程低溫阻斷了染色質降解，又通過高效破碎確保了細胞均一性。相比傳統方法，該方案使樣本處理時間大大縮短，實驗成功率從50%提升至 100%，為動物內臟組織的 HI-C、ATAC-seq 等對 “染色質完整性” 敏感的實驗提供了可靠的前處理方案。后續(xù)嘗試處理雞腎臟、脾臟等樣本，均獲得類似效果，證明該方法對禽類內臟組織具有普適性。

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